تشخیص آناپلاسما اوویس بر اساس ژن 16S rRNA با روش PCR-RFLPدر گوسفندان قسمت مرکزی ایران

  خلاصه:  واکنش زنجیره ای پلیمراز یکی از اختصاصی ترین روش های تشخیص تفریقی گونه های آناپلاسما می باشد . واکنش زنجیره ای پلیمراز بر اساس ژن 16S rRNA می تواند گونه های جنس آناپلاسما را از یکدیگر تفریق نماید ولی توالی نوکلئوتیدی ژن 16S rRNA در آناپلاسما اوویس بسیار شبیه به آناپلاسما مارجیناله می باشد(9/99%تا 2/99%) و طراحی آغازگرهای اختصاصی برای تکثیر این دو گونه غیر ممکن است.   گوسفند و بز می توانند با آناپلاسما اوویس و آناپلاسما مارجیناله آلوده شوند، بنابراین هدف مطالعه حاضر طراحی و بکارگیری آزمون PCR-RFLP در تشخیص اختصاصی گونه های مذکور بر اساس ژن 16S rRNA در گوسفند و بز می باشد. در این مطالعه 150 نمونه خون و اسمیر خونی از گوسفندان بدون علایم بیماری گوسفند داری های اطراف اصفهان که سابقه بیماری های منتقله از کنه را داشته اند تهیه شد. در ابتدا گسترش های خونی با گیمسا رنگ آمیزی شدند و از نمونه های خونی که در گسترش خونی دارای نقاط حاشیه ای در گلبولهای قرمز بودند DNA استخراج شد. DNA استخراج شده با آزمون semi-nested PCR اختصاصی برای گونه های آناپلاسما اوویس و آناپلاسما مارجیناله وآزمون PCR-RFLP ، با استفاده از آغازگرهای مشتق از ژن 16S rRNA و آنزیم اندونوکلئاز (FunD II) MvnI مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفت. آنزیم اندونوکلئاز (FunD II) MvnI توالی (CGCG) را در محصول semi-nested PCR مربوط به آناپلاسما اوویس،ا مورد شناسایی قرار می دهد و در موقعیت نوکلئوتید 70 محصول مورد نظر را می برد. در حالی که این آنزیم نمی تواند محصول semi-nested PCR مربوط به آناپلاسما مارجیناله (TACG) را برش دهد. آزمون ساده semi-nested PCR و متعاقب آن PCR-RFLP بر اساس ژن 16S rRNA قادر است در کمترین زمان آناپلاسما اوویس را شناسایی و از آناپلاسما مارجیناله تفریق کند و این روش در تحقیقات اپیدمیولوژی و روش های کنترلی مفید و قابل استفاده می باشد